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垂體組織消化手冊(cè)

 更新時(shí)間:2016-02-16 點(diǎn)擊量:1561

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Worthington組織消化指南

引言

組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細(xì)胞生物學(xué)研究的原代細(xì)胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經(jīng)普遍應(yīng)用多年,但是對(duì)其組織消化和細(xì)胞收集的作用機(jī)制卻沒有全面的理解。  由此導(dǎo)致的結(jié)果便是選擇一種消化方法大多是隨機(jī)選擇或基于過去的經(jīng)驗(yàn),而不是在*理解消化原理的基礎(chǔ)上選擇的消化方案,以及如何根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康男拚桨敢垣@得更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

細(xì)胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個(gè)細(xì)胞,而影響結(jié)果的原因有很多,包括(不限于)以下:

1、組織類型

2、物種來源

3、動(dòng)物年齡

4、遺傳改造情況(如knockouts

5、所用的消化培養(yǎng)液

6、所用的酶

7、消化酶中的雜質(zhì)

8、所用消化酶的工作濃度

9、溫度

10、孵育時(shí)間

通常前四個(gè)原因沒辦法選擇,而剩下的原因一般由經(jīng)驗(yàn)決定以獲取zui適實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

通過查閱文獻(xiàn)來選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)搞得一頭霧水。這些巨大差異來源于組織胞外基質(zhì)的復(fù)雜而動(dòng)態(tài)的特性,以及過去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外,組織胞外基質(zhì)由各種蛋白、糖蛋白、脂類和糖脂組成,這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育(年齡)之間存在明顯的差異,這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶,如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。

本指南總結(jié)了目前常用組織消化酶的zui適消化和細(xì)胞收集知識(shí)和方法,描述了標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)步驟, 便于制定一個(gè)*的細(xì)胞分離方案,同時(shí)列舉了一些相關(guān)的參考文獻(xiàn)。

下表列出多種組織的適宜消化酶(含參考文獻(xiàn),以組織類型和物種分類,詳見鏈接)

脂肪組織

腎上腺組織

骨組織

腦組織

軟骨組織

結(jié)腸組織

內(nèi)皮組織

上皮組織

心臟

淋巴結(jié)

乳腺

其它組織

其他組織

肌組織

神經(jīng)組織

胰腺

腮腺

垂體

前列腺

生殖

動(dòng)物鱗片

皮膚

脾臟

干細(xì)胞

胸腺

甲狀腺/甲狀旁腺

扁桃體

腫瘤

 

 

 

注:使用Worthington公司消化酶的文獻(xiàn)不限于上表鏈接中所列,一般而言,Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類型的消化。

 

垂體組織消化手冊(cè)

 

物種詳細(xì)來源細(xì)胞名稱消化用酶培養(yǎng)基參考文獻(xiàn)
牛犢, 雄性,不到6個(gè)月大PituitaryCollagenase: 0.3%DMEMHassan, H., and Merkel, R.: Perifusion Model System to Culture Bovine Hypothalamic Slices In Series with Dispersed Anterior Pituitary Cells, In Vitro Cell Dev Biol 30A, 435, 1994
PituitaryCollagenase: 0.1%EBSS, CMFMason, W. and Ingram, C.: Techniques for Studying the Role of Electrical Activity in Control of Secretion by Normal Anterior Pituitary Cells, Vol. 124,, , 207, 1986
Follicular, anterior pituitary and pars tuberalisDeoxyribonuclease I: 200 礸/mlHBSS, CMFFerrara, N., Goldsmith, P., Fujii, D., and Weiner, R.: Culture and Characterization of Follicular Cells of the Bovine Anterior Pituitary and Pars Tuberalis, Vol. 124,, , 245, 1986
牛犢, 雄性, 1-6 周大PitituaryHyaluronidase: 0.1%DMEMRidgway, E., Klibanski, A., Marorana, M., Milbury, P., Kieffer, J., and Chin, W.: The Effect of Somatostatin on the Release of Thyrotropin and its Subunits from Bovine Anterior Pitituary Cells in Vitro, Endocrinology 112 (6), 1937, 1983
小鼠小鼠, 雄性PituitaryCollagenase: 0.4%DMEM/Han's F12Steveson Tami C, Ciccotosto Giuseppe D, Ma Xin-Ming, Mueller Gregory P, Mains Richard E, Eipper Betty A: Menkes protein contributes to the function of peptidylglycine alpha-amidating monooxygenase, Endocrinology 144, 188-200, 2003
Hyaluronidase: 0.1%
Trypsin: 0.3%
綿羊綿羊, 成年的SomatotropesCollagenase Type 1: 0.3%Medium 199Xu Ruwei, Wang Qinling, Yan Ming, Hernandez Maria, Gong Changhong, Boon WahChin, Murata Yoko, Ueta Yoichi, Chen Chen: Orexin-A augments voltage-gated Ca2+ currents and synergistically increases growth hormone (GH) secretion with GH-releasing hormone in primary cultured ovine somatotropes, Endocrinology 143, 4609-19, 2002
Hyaluronidase: 
大鼠大鼠, 雄性, 12-15 周PituitaryCollagenase Type 2: 0.4%DMEMAkieda-Asai, S., Zaima, N., Ikegami, K., Kahyo, T, Yao, I., Hatanaka, T., Iemura, S., Sugiyama, R., Yokozeki, T., Eishi, Y., Koike, M., Ikeda, K., Chiba, T., Yamaza, H., Shimokawa, I., Song, S., Matsuno, A., Mizutani, A., Sawabe, M. Chao, N., Tanaka, M., : SIRT1 Regulates Thyroid-Stimulating Hormone Release by Enhancing PIP5K gamma Activity through Deacetylation of Specific Lysine Residues in Mammals., PLoS ONE 5, e11755, 2010
Deoxyribonuclease I: 0.04%
大鼠Wistar大鼠, 雄性, 2個(gè)月大PituitaryTrypsin: 0.1%DMEMZhou, X., De Schepper, J., De Craemer, D., Delhase, M., Gys, G., Smitz, J., and Hooghe-Peters, E.: Pituitary Growth Hormone Release and Gene Expression in Cafeteria-Diet-Induced Obese Rats, J Endocrinol 159, 165, 1998
大鼠SD大鼠, 雌性, 200 - 250克Anterior pituitary glandTrypsin: 0.1%EBSS, CMFD'Emden, M. and Wark, J.: Culture Requirements for Optimal Expression of 1,25-Dihydroxyvitamin D3-Enhanced Thyrotropin Secretion, In Vitro Cell Dev Biol 27, 197, 1991
大鼠大鼠PituitaryTrypsin: 0.3 %HEPESWilfinger, W., Larsen, W., Downs, T., and Wilbur, D.: An In Vitro Model for Studies of Intercellular Communication in Cultured Rat Anterior Pituitary Cells, Tissue Cell 16 (4), 483, 1984
大鼠SD大鼠, 雄性, 250-450克Anterior pituitaryTrypsin: 0.25%KrebsPortanova, R., Smith, D., and Sayers, G.: A Trypsin for the Preparation of Isolated Rat Anterior Pituitary, Proc Soc Exp Biol Med 133, 573, 1970

 

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